Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии
объектов можно готовить срезы и без заливки при помощи замораживающего микротома (замораживающего столика) и вибратома.
Перед обезвоживанием материала производят подготовку фиксированных кусочков органов и тканей для гистологического исследования (вырезку). Вырезанные кусочки должны иметь толщину не более 0,8 см (оптимально – 0,3 – 0,5 см), длину и ширину в пределах 1,5 – 2,0 см, т. е. не более длины сторон стандартного покровного стекла. При использовании для проводки гистологических кассет размеры кусочка ткани ограничиваются размерами кассеты. Не рекомендуется изготавливать слишком крупные кусочки, так как если они будут плотно прилегать к стенкам кассеты, то пропитка материала растворами в этом месте будет плохая. Также не рекомендуется складывать несколько кусочков тканей в одну кассету, поскольку они могут слипнуться и плохо пропитаться.
Перед проводкой материала кусочки органов и тканей, которые были фиксированы в формалине, промывают в проточной воде (до 24 ч) и подсушивают на фильтровальной бумаге.
Для обезвоживания материала обычно используют несколько порций этилового спирта восходящей крепости. Для материала, фиксированного в формалине, рекомендуется начинать с 70 – 80 %-го этанола, в котором объекты могут находиться длительное время без существенного сжатия и изменения тинкториальных свойств. Кроме этанола для обезвоживания может быть применен безводный ацетон, изопропанол, диоксан, глицерин. Обезвоживание ускоряется при постоянном перемешивании жидкости, которое обеспечивают автоматизированные системы проводки карусельного типа (Sakura Rotary Tissue Processor, Leica TP1020, Microm STP 120, АТ-5).
Продолжительность пребывания объектов в спирте обусловлена их размерами, свойствами тканей и особыми задачами исследования (например, необходимостью максимального удаления липоидов из нервной ткани перед заливкой в целлоидин и окраской по Нисслю).
Для обезвоживания кусочков обычного размера (1,0 – 2,0 × × 1,0 – 1,5 × 0,5 – 0,8 см) можно рекомендовать следующие схемы ручной проводки (при комнатной температуре без постоянного перемешивания).
Первая схема:
– этанол 80 %-й – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (I) – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (II) – 18 – 24 ч;
– этанол абсолютный – 6 – 24 ч.
Вторая схема:
– этанол 80 %-й – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (I) – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (II) – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (III) – 18 – 24 ч.
Третья схема:
– этанол 80 %-й – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (I) – 18 – 24 ч;
– этанол 96 %-й (II) – 18 – 24 ч;
– метилсалицилат (или метилбензоат) – этанол 96 %-й (1: 1) – 2 ч;
– метилсалицилат (или метилбензоат) – 12 – 24 ч.
В метилсалицилате материал можно долго хранить без ухудшения качества препаратов (Коржевский Д. Э., 1996; Коржевский Д. Э. [и др.], 2008). Так как проводка через метилсалицилат и метилбензоат приводит к смягчению плотных объектов, ее полезно использовать при обработке кусочков кожи и органов, содержащих много мышечной и соединительной ткани.
Ускорения процесса обезвоживания