Руководство к практическим занятиям по биохимии. Учебное пособие для студентов специальностей «Ветеринария» и «Ветеринарно-санитарная экспертиза»
фотометр используется для определения концентрации вещества в растворе по оптической плотности или коэффициенту пропускания раствора. Действие фотометра основано на том, что многие химические соединения поглощают свет в определенной спектральной области. При этом в определенных пределах концентраций величина оптической плотности раствора (то есть интенсивность поглощения света) прямо зависит от концентрации вещества в растворе. Оптическая плотность раствора определяется по формуле:
D = E l • c
D – оптическая плотность
E – коэффициент молярной экстинкции
l – толщина кюветы
c – концентрация раствора
E – коэффициент молярной экстинкции (или молярный коэффициент поглощения) – это оптическая плотность раствора концентрацией 1 моль/л при длине светового пути (толщине кюветы) равной 1 см. Величина постоянная для каждого вещества при данной длине волны.
1 – ручка изменения длины волны излучения
2 – световое табло
3 – панель управления
4 – крышка кюветного отделения
5 – ручка перемещения кювет
6 – тумблер «Сеть»
7 – выбор режима измерения оптической плотности
8 – градуировка
9 – результаты измерения оптической плотности холостой пробы (воды)
10 – результаты измерения оптической плотности исследуемого раствора
11 – кювета (внешний вид)
1. Включите прибор в сеть. При закрытой крышке кюветного отделения включите тумблер «Сеть» (6), расположенный на боковой поверхности прибора. Тумблер загорится красным светом. В нижней половине светового табло (2) сначала появится надпись «Прогрев прибора», затем надпись «Прогрев лампы». По истечении 10 мин фотометр выдаст звуковой сигнал и на табло появится надпись «Готов к работе. Введите режим».
2. Последовательным нажатием клавиши D на панели управления (3) выберите нужный режим измерения (А – оптическая плотность), который высветится в нижней части светового табло (7).
3. Установите нужную длину волны круглой ручкой (1), находящейся слева на передней панели прибора (значение длины волны высвечивается в верхней строке светового табло). Установку длины волны необходимо выполнять подводкой со стороны коротких волн к более длинным. Если при установке значение длины волны превысило требуемое, необходимо вновь вернуться на 20–30 нм к более коротким волнам и повторно аккуратно подвести к требуемому значению длины волны.
4. Промойте водой кюветы (11) и промокните их внутреннюю поверхность чистой фильтровальной бумагой. Снаружи также протрите их фильтровальной бумагой. Откройте крышку кюветного отделения (4). Налейте в кювету воду и установите ее строго вертикально в дальнее гнездо кюветодержателя. Исследуемый раствор налейте во вторую кювету и установите ее в ближнее гнездо кюветодержателя. При установке